01.血清

采集的全血置于 4℃ 冰箱过夜。以 1000–3000 rpm 离心 10 分钟，取上清，立即检测或于 -20℃/-80℃ 保存（1–3 个月）。

02.血浆

采用添加 EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂的血浆，充分混匀。以 1000–3000 rpm 离心 10 分钟，取上清，立即检测或于 -20℃/-80℃ 保存（1–3 个月）。

03.组织匀浆

取用 0.01 mol/L PBS 洗涤过的组织块，按 1 g 组织加入 5–10 mL 组织蛋白提取试剂的比例，在冰浴条件下混匀。充分匀浆后，以 5000–10000 rpm 离心 10 分钟，取上清立即检测，或于 -20℃/-80℃ 保存（1–3 个月）。

04.细胞培养上清

以 1000–3000 rpm 离心 10 分钟，取上清立即检测，或于 -20℃/-80℃ 保存（1–3 个月）。

05.尿液、腹水、脑脊液等

以 1000–3000 rpm 离心 10 分钟，取上清立即检测，或于 -20℃/-80℃ 保存（1–3 个月）。

1.采血管必须无热原、无内毒素。 2.不建议使用溶血或高脂标本。 3.样本最终应清亮透明，所有颗粒物需经离心去除。 4.若样本不能立即使用，应按单次用量分装，于 - 20～-80℃冷冻保存，严格避免反复冻融。 5.通常需要对样本进行稀释优化，使其读数落在标准曲线有效范围内。建议大批量检测前先做预实验，确定是否需要稀释。 6.建议采集足量样本用于多次检测，避免因操作问题导致数据丢失。 7.采集及处理样本时必须穿戴防护用品（如手套、实验服、呼吸器等），并注意标本处理中的潜在风险。 8.标本处理应在维护良好的生物安全柜内进行。

建议使用者充分了解待测样本的预期浓度范围。建议查阅相关学术文献中同类样本的浓度参考，并据此对样本进行适当稀释。1.请提前 20 分钟将ELISA试剂盒从冰箱取出，恢复至室温后开始实验。 2.浓缩洗涤液用双蒸水按 1:25 稀释，未用完的洗涤液放回试剂盒内保存。 3.标准品：向冻干粉标准品瓶中加入 1.0 mL 标准品稀释液，静置 30 分钟。待标准品完全溶解后，轻轻混匀并做好标记。 4.标准品稀释方法说明：取 7 支洁净离心管，分别标记 ②、③、④、⑤、⑥、⑦、⑧。每管加入 300 μL 标准品稀释液。从①管吸取 300 μL 至②管，混匀；再从②管吸取 300 μL 至③管，混匀；重复上述步骤至⑦管。⑧管为阴性对照。 5.复溶后的标准品储备液不可重复使用。 6.生物素化抗体：根据待检测孔位数取适量生物素化抗体，用抗体稀释液按 1:100 稀释。需提前 30 分钟配制，严禁重复使用。 7.酶结合物：根据待检测孔位数取适量酶结合物，用酶稀释液按 1:100 稀释。需提前 30 分钟配制，严禁重复使用。 显色液：显色液 A 与显色液 B 按 9:1 比例混合，提前 30 分钟配制。

以标准品浓度为 X 轴，OD 值为 Y 轴，用平滑曲线连接各标准品坐标点。将样本 OD 值代入标准曲线方程，即可计算样本浓度。建议使用专业曲线拟合软件（如 Curve Expert 1.3）进行结果分析与计算。